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净化

品系净(jing)化(hua)是指(zhi),通过特(te)定处理,消除病毒、细菌和寄生虫,得(de)到SPF级别动物(wu)的服(fu)务。im体育通过胚胎清(qing)洗和胚胎移(yi)植的方式,获(huo)得(de)SPF级别的动物(wu);同时(shi)委(wei)托第三方提供相关微(wei)生物(wu)检测服(fu)务,出具相关检测合格报告。


1.服务类别

净(jing)化(hua)(hua)(hua)服(fu)务,根据饲养环境不(bu)同分为两类:IVC净(jing)化(hua)(hua)(hua)和隔离器净(jing)化(hua)(hua)(hua)。根据净(jing)化(hua)(hua)(hua)级别,使用(yong)的(de)代孕(yun)鼠(shu)和净(jing)化(hua)(hua)(hua)方(fang)案、设(she)施均不(bu)同。常用(yong)的(de)净(jing)化(hua)(hua)(hua)标准包括:(1)VAF/PLUS®;(2)GB-SPF;(3)VAF/ELITE®;(4)定制(zhi)标准。

根据基因型不同,可以分(fen)为纯合(he)(he)净(jing)化或者(zhe)杂合(he)(he)净(jing)化。纯合(he)(he)净(jing)化需要(yao)准(zhun)备一定数量,基因型均为纯合(he)(he)的雌鼠和(he)雄鼠;杂合(he)(he)净(jing)化只需要(yao)提供基因型符(fu)合(he)(he)需要(yao)的2~3只可育(yu)雄鼠即可。


2.服务(wu)简(jian)介

胚(pei)胎(tai)净化(hua)的(de)(de)目(mu)的(de)(de)是获得无特(te)(te)定(ding)病原体(ti)(ti)(Specific pathogen Free, SPF)动物(wu),即体(ti)(ti)内无特(te)(te)定(ding)的(de)(de)微生(sheng)(sheng)物(wu)和(he)寄生(sheng)(sheng)虫(chong)存在的(de)(de)动物(wu)。常(chang)用的(de)(de)方法(fa)包括(kuo)剖腹产(chan)和(he)胚(pei)胎(tai)移植,但由于剖腹产(chan)不(bu)能消除(chu)垂直传播(bo)的(de)(de)病毒(du)(如鼠(shu)巨细(xi)胞(bao)病毒(du)MCMV;淋巴(ba)细(xi)胞(bao)性脑膜(mo)炎(yan)病毒(du)LCMV和(he)脑胞(bao)内原虫(chong)ECUN),且对于手术(shu)设施依赖程度较(jiao)大(da),目(mu)前通(tong)过胚(pei)胎(tai)移植的(de)(de)方法(fa),消除(chu)病毒(du)、细(xi)菌和(he)寄生(sheng)(sheng)虫(chong),是易行的(de)(de)品系净化(hua)方法(fa)。


胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)净化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)理(li),是(shi)发(fa)育早期游离状(zhuang)态的(de)(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)有透明(ming)带(dai)(dai),可(ke)以防止(zhi)细菌、寄生虫和(he)(he)大部分病毒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)侵袭(xi);通(tong)过(guo)无限稀释的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)将透明(ming)带(dai)(dai)外(wai)面的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)生物含量降(jiang)至极低的(de)(de)(de)(de)(de)(de)水平(ping),移植到(dao)(dao)代(dai)孕的(de)(de)(de)(de)(de)(de)健康小(xiao)(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)(shu)体(ti)内(nei)后,小(xiao)(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)免(mian)疫(yi)系统(tong)会(hui)清除(chu)掉这(zhei)些微(wei)生物,而(er)达到(dao)(dao)净化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。国际胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)移植协会(hui)推荐的(de)(de)(de)(de)(de)(de)标(biao)准,是(shi)在特定的(de)(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)养(yang)液微(wei)滴中(zhong)进(jin)(jin)行10次(ci)(ci)清洗,每(mei)次(ci)(ci)大约100倍的(de)(de)(de)(de)(de)(de)稀释。即(ji)便如(ru)(ru)(ru)此,仍有净化(hua)失败的(de)(de)(de)(de)(de)(de)风险,例(li)如(ru)(ru)(ru),鼠(shu)(shu)(shu)(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)细小(xiao)(xiao)病毒(MMV),有研究发(fa)现(xian)其可(ke)以通(tong)过(guo)透明(ming)带(dai)(dai)进(jin)(jin)入胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)内(nei)部;有时(shi)采(cai)(cai)(cai)用的(de)(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)是(shi)通(tong)过(guo)体(ti)外(wai)受(shou)精(IVF),或透明(ming)带(dai)(dai)受(shou)到(dao)(dao)破坏的(de)(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(如(ru)(ru)(ru)冷冻(dong)、解冻(dong)),这(zhei)些情(qing)况(kuang)需要采(cai)(cai)(cai)用不同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)策略(lve)。研究发(fa)现(xian),通(tong)过(guo)胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)移植进(jin)(jin)行净化(hua),胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)获(huo)取方(fang)(fang)法(fa)(雌鼠(shu)(shu)(shu)(shu)和(he)(he)雄(xiong)鼠(shu)(shu)(shu)(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)准备)和(he)(he)胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)处理(li)(洗涤(di)(di)和(he)(he)培(pei)养(yang))策略(lve),会(hui)影响(xiang)胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)净化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)结(jie)果[1~4]。胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)获(huo)取的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)中(zhong),采(cai)(cai)(cai)用雄(xiong)鼠(shu)(shu)(shu)(shu)(携(xie)带(dai)(dai)病原(yuan)(yuan)体(ti))与同(tong)品(pin)系雌鼠(shu)(shu)(shu)(shu)(SPF)交配的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)获(huo)得胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai),后代(dai)净化(hua)污染病原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)风险很低;可(ke)以不需要对胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)进(jin)(jin)行微(wei)生物分析(xi),即(ji)杂合净化(hua)[2]。胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)处理(li)常用的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)是(shi)多(duo)次(ci)(ci)洗涤(di)(di)和(he)(he)一定时(shi)间的(de)(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)养(yang)[1,3]。若胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)是(shi)通(tong)过(guo)IVF,或透明(ming)带(dai)(dai)受(shou)到(dao)(dao)破坏的(de)(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)(如(ru)(ru)(ru)冷冻(dong)、解冻(dong)),需要对胚(pei)(pei)(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)(tai)(tai)培(pei)养(yang)液进(jin)(jin)行分析(xi),以确认是(shi)否(fou)有病原(yuan)(yuan)微(wei)生物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)污染,这(zhei)些净化(hua)后代(dai)需要每(mei)窝分别检测(ce)[4]。


为了确(que)保净(jing)化(hua)成功,需要对(dui)净(jing)化(hua)的(de)(de)流程进行(xing)(xing)标(biao)准化(hua)控制(见(jian)图示)。①净(jing)化(hua)前,对(dui)净(jing)化(hua)品系的(de)(de)病(bing)原(yuan)感染情况进行(xing)(xing)评(ping)估,如对(dui)清(qing)洗(xi)胚胎的(de)(de)溶液进行(xing)(xing)Q-PCR分析,确(que)认病(bing)毒含量;②净(jing)化(hua)时,净(jing)化(hua)品系与(yu)SPF野生(sheng)雌鼠交配获取胚胎,降低病(bing)毒通过透明带进入胚胎的(de)(de)概率(lv);③净(jing)化(hua)后,对(dui)哨兵鼠或净(jing)化(hua)大(da)小(xiao)鼠进行(xing)(xing)微生(sheng)物检测确(que)认病(bing)原(yuan)是否净(jing)化(hua)掉。由于从微生(sheng)物感染到检测出来有一定的(de)(de)潜伏期(qi),因而应根(gen)据(ju)具(ju)体的(de)(de)情况制定相(xiang)应的(de)(de)策略。


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常用的(de)净化标准有GB-SPF、FELASA、VAF/PLUS®和VAF/ELITE®等(deng)。检(jian)(jian)(jian)测的(de)微生物项(xiang)(xiang)目(mu)(mu)越多,产生的(de)检(jian)(jian)(jian)测费(fei)用也会越多。但是对(dui)于特定研究(jiu)而言,也不(bu)(bu)是检(jian)(jian)(jian)测的(de)项(xiang)(xiang)目(mu)(mu)越多越好,应根据(ju)实(shi)(shi)际的(de)实(shi)(shi)验要(yao)(yao)求选(xuan)择相应的(de)标准。一般选(xuan)择的(de)原则是:免疫(yi)缺(que)陷动物需(xu)要(yao)(yao)采(cai)用隔离(li)器(qi)净化(排(pai)除环(huan)境(jing)菌);非(fei)免疫(yi)缺(que)陷动物采(cai)用IVC净化即(ji)可(一般不(bu)(bu)需(xu)要(yao)(yao)排(pai)除环(huan)境(jing)菌)。IVC净化的(de)代孕母(mu)鼠(shu)来自于屏障(zhang)设施,隔离(li)器(qi)净化代孕母(mu)鼠(shu)来自于隔离(li)器(qi),后(hou)者购(gou)鼠(shu)费(fei)用和饲养费(fei)用较高(gao),特别是对(dui)于特殊品(pin)系,1个品(pin)系就需(xu)要(yao)(yao)使用1个隔离(li)器(qi)3~4个月时间。我们可根据(ju)客(ke)户需(xu)求增(zeng)加检(jian)(jian)(jian)测项(xiang)(xiang)目(mu)(mu),费(fei)用根据(ju)检(jian)(jian)(jian)测项(xiang)(xiang)目(mu)(mu)增(zeng)减。

通常情况下(xia)获得(de)符合健康(kang)标准的(de)动物(wu)模型,就(jiu)可以排除微生物(wu)的(de)干扰,进行扩繁或(huo)开始(shi)正式的(de)实验。


参考文献:

[1] Risks of transmissible diseases in relation to embryo transfer. Reprod. Nutr. Dev. 41 (2001) 439–450

[2] Embryo Transfer Rederivation of C.B-17/Icr-Prkdcscid Mice Experimentally Infected with Mouse Parvovirus 1. Comparative Medicine. Vol 58, No 4 August 2008 Pages 353–359

[3] Rederivation by Embryo Transfer in Strains of Laboratory Mice and Rats. Russian Journal of Genetics: Applied Research. 2013, Vol. 3, No. 4, pp. 305–315

[4] www.jax.org/jaxmice/health Aligning Health Surveillance and Risk in Embryo Transfer, Embryo wash testing.