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SARS-CoV-2 假病(bing)毒

SARS-CoV-2 假病


假病毒(du)描述:

SARS-CoV-2假病毒以(yi)HIV病毒为骨架,外面包被SARS-Cov-2Spike 蛋白,能够感染过表(biao)达人ACE2的细胞。可用于测试(shi)研究阻断病(bing)毒侵入的中和抗体或其它(ta)药物。假病(bing)毒只能(neng)单次感染,不能(neng)复(fu)制,安(an)全性高,可在P2级(ji)实验室使用。

 

假病毒参数(shu):

产品名称

SARS-CoV-2 假(jia)病毒(du)

货号

VS-SC-0001

荧(ying)光基团

eGFPLuciferase

生物安全(quan)防护措(cuo)施

P2级实验室

包装

100~200ul

感染滴度

2×105 TU*(基于hACE2-COS7细胞)

拷贝数

108

保存

-80

* TUtransfection unit),1TU=使1个细(xi)胞发出(chu)绿色荧光。

 

假病毒制备(bei):

im体育将Spike蛋白表达质(zhi)粒、包(bao)装质(zhi)粒、转移(yi)质(zhi)粒共转染到293T细胞(bao)内,包装(zhuang)出以SARS-CoV-2-Spike为表面(mian)衣壳蛋(dan)白的(de)假(jia)病毒。假(jia)病毒同时带有Firefly LuceGFP标(biao)记,可以通过有Firefly Luc和(he)eGFP检测感染。示意(yi)图(tu)如下:

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注意事项:

1) 病(bing)毒使用PEG8000浓(nong)缩,会有血清蛋白沉(chen)淀,外(wai)观浑浊,但不(bu)影响使用。

2) 病毒干冰运(yun)输,-80℃保存,使用前室(shi)温融化。

 

使用方(fang)法:

1. 第一天,96孔板每孔接种5×103hACE2-COS7细胞(bao)。

2. 第(di)二天(tian),除去培(pei)(pei)养(yang)板里的培(pei)(pei)养(yang)基,新(xin)鲜(xian)培(pei)(pei)养(yang)基(100ul/孔)与假病毒2×103 TUPolybrene混合(5ug/ml终浓度),加入(ru)培养(yang)孔(kong),培养(yang)板离心(1200g x 2 Hour4℃)。

2×103 TU时,luciferase的亮度约为1×106)。

3. 离心感(gan)染的细胞,吸(xi)干(gan)净培养基(ji),再用PBS洗一次;每(mei)孔加入30ul 0.25%的胰(yi)酶,37℃孵育5min,加入(ru)100ul完(wan)全培养(yang)基,继续培养(yang)。

4. 感(gan)染后继(ji)续培(pei)养3天(每天换液),进(jin)行luc检测(ce),也可以观察eGFP荧光(根据情况更(geng)换(huan)培养(yang)基(ji))。